作者：谭笑红，何静玲，崔奕文，张莉娜，崔景辉，范阿彦，任华 ，广州健仑生物科技有限公司

  

【摘要】  目的  比较几种肺炎支原体IgM(MP-IgM)检测方法的敏感性、特异性和准确度，供不同条件的实验室根据实际组合应用。方法  酶联免疫吸附试验，金标斑点法，冷凝集试验，间接血凝试验，明胶颗粒凝集法。结果  冷凝集试验与其他四种方法存在显著性差异。结论  酶联免疫吸附试验敏感性最好，金标斑点法特异性最好，间接血凝法和明胶颗粒凝集法较实用，冷凝集试验诊断意义不大。

【关键词】  肺炎支原体；酶联免疫吸附试验；金标斑点法；间接血凝试验；冷凝集试验;乳胶颗粒凝集法
    
The comparison of the laboratory serologic detections of Mycoplasma pneumonia antibody IgM 检验地带网

 

TAN Xiao-hong，HE Jing-ling，CUI Yi-wen，et al.

Department of Clinical Laboratory， the No.210 Hospital of PLA， Dalian 116021，China

【Abstract】  Objective  To compare the sensitivity，specificity and accuracy of serologic detection of Mycoplasma pneumonia antibody IgM (MP-IgM)for different clinical laboratories to choose.Methods  Enzyme linked immunosorbent assay(ELISA);Cold agglutination test(CAT);indirect haemagglutination assay(IHA);polystyrene latex agglutination reaction(PLA);Dot-immunogold method(DIM).Results  There is prominent difference between CAT and the others.Conclusion  The sensitivity of the ELISA is the best，the specificity of the DIM is the best，the IHA and PLA are more practical，and the diagnosis meaning of the CAT is little.

【Key words】  MP；ELISA；CAT；IHA；DIM；PLA

    肺炎支原体 (Mycoplasma pneumoniae，MP)是介于病毒和细菌之间的一种微生物，是一类能在无生命培养基上生长繁殖的最小原核细胞型微生物。MP感染可在任何年龄发生，尤其以5～20岁更多见［1］。MP通过飞沫以气溶胶微粒的形式传播，感染后引起肺炎支原体肺炎（Mycoplasmal pneumonia，MPP），每隔3～5年出现一次地区性流行，占各类肺炎总数的10%～20%，入伍新兵患肺炎者30%～50%由肺炎支原体引起［2］；约占非细菌性肺炎的1／3以上［3］。另外还可引起肺外各系统改变，且有死亡病例报道，已引起临床关注。

 

实验室检测肺炎支原体IgM(MP-IgM)是确诊MPP的有效手段，本文比较了几种常用检测方法的敏感性、特异性等指标，不同条件的实验室可根据实际组合应用，既为临床提供更快更准确的诊疗依据，又尽可能减少成本。

 

1  材料与方法

1.1  主要仪器 

TECAN洗板机和TECAN SPECTRA型酶标仪。

1.2  材料 

(1)中澳合作北京美迪科生物技术有限公司酶免法测定抗肺炎支原体(IgM）试剂盒;(2)美国 ALTRU BIOMEDCAL INC. 快速检测肺炎支原体MP-IgM金标免疫斑点检测卡;(3)首都儿科研究所间接血凝试剂;(4)富士瑞必欧株式会社(FUJIREBIO INC.)赛乐迪亚-麦可Ⅱ(SERODIA-MYCOⅡ）明胶颗粒;(5)本院临床确诊MPP患者血清100人份，正常人血清100人份。

1.3  方法 

(1)酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）；(2)金标免疫斑点法（Dot immunogold method，DIM）；(3）冷凝集实验（Cold agalutination test，CAT）；(4）间接血凝试验（Indirect haemagglutination assay，IHA）；(5）明胶颗粒凝集实验（Polystyrene latex agglutination reaction，PLA）。

2  结果

将临床确诊MPP及正常人各100份血清分别用五种方法进行检测，比较其各种评价指标及与临床诊疗的符合情况。分别统计各方法的真阳性（TP）、假阳性（FP）、真阴性（TN）、假阴性（FN），结果（见表1），并计算敏感度、特异度、准确度、阳性预测值（+PV）、阴性预测值（-PV）、阳性拟然比（+LR）和阴性拟然比（-LR）（见表2）。表1  五种方法的测定结果 例（略）表2  五种方法的六项评价指标（略）
 
    经过t检验，冷凝集试验的敏感度、特异度和准确度均与其他方法差异有显著性(P＜0.05);其他四种方法差异没有显著性(P>0.05)。结论：金标斑点法的阳性拟然比最高，是确诊MPP的最好方法，酶联免疫吸附试验次之;而酶联免疫吸附试验的阴性拟然比最高，是否认该病的最好方法；间接血凝法、明胶颗粒凝集实验仅次于前两者，较实用，且明胶颗粒凝集实验操作简单，快速；冷凝集试验的临床诊断价值不大。

    3  讨论

随着临床诊断技术的不断发展，证实肺炎支原体是呼吸道及其他器官感染的重要病因之一，发病率日益增加并有流行趋势，临床重症病例和肺外并发症常有发生，MP的临床表现、X线征象均缺乏特异性，且须与病毒性肺炎、军团菌肺炎相鉴别，只能通过实验室检查病原体分离阳性和血清学试验进行鉴别诊断、确诊。血清中特异性抗体可通过冷凝集试验（CAT）、间接血凝试验（IHA）、明胶颗粒凝集实验（PLA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、金标免疫斑点法(DIM)等方法进行测定。

冷凝集试验（CAT）是根据支原体患者血清中有一种抗红细胞I抗原的抗体称红细胞凝集素，能与自身或“O”型人的红细胞在0℃～40℃条件下发生凝集反应，37℃时已凝集的红细胞呈可逆性完全分开［4］。发病后2周，约半数病例产生抗体，红细胞冷凝集试验阳性，滴定效价在1：32以上，恢复期效价4倍增加的意义大。但MPP轻症阳性率只有30%左右，且50%左右正常人血清中有冷凝集素，只是小于1：10，有时大叶性肺炎也呈阳性反应，尤其是当患有下列疾病时，冷凝集试验亦有较高效价的阳性反应：流行性感冒、传染性单核细胞增高症、锥虫病、肝硬化、黑水热、重症贫血、骨髓瘤、热带性嗜酸粒细胞增高症、腮腺炎并发睾丸炎、疟疾、螺旋体病等［5］。因CAT特异度和敏感度均为最低，因此其临床诊断价值不大。 检验地带网

间接红细胞凝集反应（IHA）一般用绵羊红细胞以单宁酸处理，再以MP抗原使之结合，如加上抗体则可见红细胞凝集反应，其抗原效价为32倍左右［6］。统计学处理表明间接血凝试验在临床应用中仍具有较高使用价值。灵敏度、误诊率、阴性预测值较高，而特异度、漏诊率、阳性预测值较低，且价格低廉，适合于发现病例。

富士明胶颗粒凝集法（PLA）是将肺炎支原体（株）细胞膜成分致敏人工明胶颗粒，致敏粒子再与人血清中存在的肺炎支原体抗体发生凝集反应。操作简单、迅速，并尽可能消除红细胞载体引起的非特异性凝集，凝集图像清晰，过夜后再判读不发生显著变化，灵敏度1：320左右，特异性强，重复性好，适合于早期诊断［7］。

金标免疫斑点法(DIM)是根据金标免疫渗滤原理，利用MP抗原采用免疫渗滤技术，检测MP抗体，黄疸、溶血无影响，分泌物、粪便标本加生理盐水离心取上清可以检测。但是敏感度略低，有漏诊的可能；阳性拟然比最高，而且操作简单快速，是确诊MPP的最好方法。 

酶联免疫吸附法（ELISA）是Engvall等于1971提出的，此法具有特异、敏感和简便等优点，已用于检查各种抗体或抗原。Franco等于1980年使用此技术检测可疑支原体肺炎病人血清中的特异性抗体，并获得了满意结果。国内有人以超声波粉碎的肺炎支原体菌液为抗原，用ELISA间接法对病人、接触者及健康人和血清做了研究。近年来，采用μ-链捕获ELISA检测肺炎支原体特异抗体IgM，在发病1周内即可检出［6］。该方法的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值、阳性拟然比和阴性拟然比均较好，适合临床常规使用。

 

【参考文献】

1  包瑛.肺炎支原体肺炎的研究进展.陕西医学杂志，2002，(10)：35-38.

2  方圻.现代内科学.北京：人民军医出版社，1996，850-853.

3  陈灏珠.实用内科学.第十版.北京：人民卫生出版社，1999，416-418.

4  王淑娟.实验诊断学.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1991，260-261. 

5  何金昌.检验结果的临床意义.广州：广东科技出版社，1985，318.

6  李之桂，范明远.感染症免疫诊断技术.北京：科学出版社，1990，254-267.

7  潘家华.小儿肺炎支原体感染快速诊断及临床意义.安徽医学1998，2：13-15.