血液组织DNA提取试剂盒(DNeasy Blood & Tissue Kit)技术简介
从动物血液和组织、细胞、酵母、细菌或者病毒中纯化总DNA
1.为各种类型样本提供标准化的纯化方法
2.即使是特殊类型起始样本也可以获得高产量DNA
3.高品质DNA
4.经过优化的操作方法适合处理多种起始样本
5.可选择离心柱方式或96孔板高通量方式
DNeasy Blood & Tissue Kit采用基于硅胶膜技术的离心柱或96孔板方式快速方便的纯化DNA。大多数样本可直接用蛋白酶K消化处理,无需机械破碎,减少了手动操作时间。为特殊样本提供优化的纯化方法,获得高重复性、高纯度的DNA,用于生物研究、基因型分析和兽医病理研究。DNA纯化流程可以使用DNeasy Blood & Tissue Kit,在QIAcube全自动核酸纯化仪上自动化进行。
详细信息:
性能
高效的DNeasy Blood & Tissue操作流程能够从动物血液和组织样本中纯化大量的总DNA。优化的实验方案可确保非标准样本的高产量,如动物毛发和培养细胞、固定的组织,或者革兰氏阳性和阴性细菌。独特的在线实验方案参考文库,可从酵母、昆虫、毛发和其他类型样本中纯化DNA。
使用DNeasy Blood & Tissue Kits从动物组织中纯化的DNA产量
样本来源 |
样本量 |
DNA(µg) |
哺乳动物血液 |
100 µl |
3–6 |
鸟类血液 |
5 µl |
9–40 |
HeLa细胞 |
2 x 106 |
15–25 |
肝脏 |
25 mg |
10–30 |
脑 |
25 mg |
15–30 |
肾脏 |
25 mg |
15–30 |
脾脏 |
10 mg |
5–30 |
小鼠尾 |
1.2 cm(尾部) |
10–25 |
大鼠尾 |
0.6 cm(尾部) |
20–40 |
猪耳 |
25 mg |
10–30 |
马毛 |
10 根毛发 |
2–4 |
鱼鳍 |
20 mg |
10–20 |
鱼卵(鲭鱼) |
10 mg |
5–10 |
DNeasy Blood & Tissue Kits简化了从多种样本类型中纯化DNA的流程,包括在生命科学、兽医学和基因分型研究应用中常见的动物种类。纯化得到的DNA不含PCR抑制剂,能在标准多重real-time PCR中进行灵敏的检测。DNeasy Blood & Tissue Kits确保了可靠的实验结果,从转基因小鼠的实验室分析到家畜的育种项目和种系基因分型研究。可以用DNeasy 96 Blood & Tissue Kit方便地扩大常规的检测应用的规模。
原理
DNeasy Blood & Tissue Kit适用于从不同的样本中,包括新鲜或冷冻的动物组织和细胞、血液或者细菌,快速纯化总DNA(如,基因组、线粒体和病原体等)。
DNeasy膜整合了硅胶膜的结合特性,经简单显微离心技术或者QIAGEN 96-Well-Plate Centrifugation System处理即可。在高浓度离液盐的环境中,DNA吸附在DNeasy膜上,可以除去溶液中水合分子的水分。DNeasy Blood & Tissue操作流程中设计的缓冲液条件,旨在使DNA特异性吸附到硅胶膜上,并且优化去除污染物和酶抑制剂。
纯化过程不需要苯酚或氯仿抽提或乙醇沉淀,仅涉及少量手工步骤。这使得DNeasy Blood & Tissue Kits非常适合同时处理多个样本。对于高通量的应用,DNeasy 96 Blood & Tissue Kit能够同时处理96或192个样本。
操作流程
可靠的硅胶膜技术,利用便捷的离心柱或96孔板形式,确保了快速可重复的DNA纯化,不再需要有机抽提和乙醇沉淀(参见DNeasy Mini and 96 procedures)。样本首先用蛋白酶K裂解。调整缓冲条件,以提供最佳的DNA结合条件并将裂解物上样到DNeasy Mini离心柱或DNeasy 96孔板上。在离心过程中,DNA选择性地结合到DNeasy膜上,污染物通过。余下的污染物和酶抑制剂将在两个高效的洗涤步骤中被去除。然后,用水或缓冲液将DNA洗脱,待用。
DNeasy Mini离心柱预装在收集管中,并且单独封存,确保方便和安全。使用DNeasy Mini离心柱的纯化过程可在QIAcube全自动核酸纯化仪上自动进行。DNeasy 96 Blood & Tissue Kit可使用QIAGEN 96-Well-Plate Centrifugation System以96孔板形式进行高通量处理。
应用
DNeasy Blood & Tissue Kits提供高品质DNA,可直接用于多种下游分析,包括:
1.生命科学研究
2.家畜育种
3.种系基因分型研究
4.兽医病理分析研究
5.常规的应用检测
技术参数:
特点 |
参数 |
Applications |
PCR, real-time PCR, genotyping |
Elution volume |
100–200 µl |
Format |
96-well plate, spin column |
Main sample type |
Blood, tissue |
Processing |
Manual |
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein |
DNA |
Sample amount |
100 µl/25 mg |
Technology |
Silica technology |
Time per run or per prep |
20 minutes – 1 hour |
Yield |
6 µg/30 µg |
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