汉坦病毒酶联免疫吸附试验（ELISA）IgG 实验
发布时间：2014-3-8 9:49:54 浏览次数：
汉坦病毒酶联免疫吸附试验（ELISA）IgG 实验
（3）缓冲液：
包被液：pH9. 6 碳酸缓冲液；
稀释液：pH7.4 PBS（含5%脱脂奶）
洗涤液：pH7.4 PBS－T（0.05％吐温－20）；
（4）显色液：A/B 液
（5）终止液：4N H2SO4
（6）酶标板、酶标仪。
检测步骤：
（1）将待检血清用稀释液从1：100 开始作2 倍连续稀释，加入抗原孔，
100μl/孔，同时设阴、阳性对照，37℃水浴1 小时；
（5）弃去血清，用洗涤液洗涤5～6 次；
（6）加酶结合物，用稀释液按工作浓度稀释，100μl/孔，37℃水浴1 小时；
（7）弃去酶标抗体，用洗涤液洗涤6 次，甩干；
（8）加显色液：于各反应孔内加A/B 液各一滴，37℃，避光3～5 分钟；
（9）加终止液于每反应孔，一滴/孔。
结果判断：
于450nm（TMB）阳性对照孔OD 值/阴性对照孔OD 值，即P/N≥2.1，对照成
立；若待检血清孔OD 值与阴性对照孔OD 比值≥2.1，则标本为出血热IgG 抗体
阳性，反之阴性。（阴性对照孔OD 值小于0.05 按0.05 记，若大于0.05 按实际
数值计算）
意义：
阳性结果，表明曾受到汉坦病毒感染，>1：100 有诊断参考意义；
恢复期血清抗体滴度比急性期抗体滴度有4 倍或4 倍以上升高则可确诊.
试验材料：
（1）纯化的重组汉坦病毒核蛋白抗原预包被酶标板：
（2）辣根过氧化物酶标记的抗人IgG 抗体；（3）缓冲液：
包被液：pH9. 6 碳酸缓冲液；
稀释液：pH7.4 PBS（含5%脱脂奶）
洗涤液：pH7.4 PBS－T（0.05％吐温－20）；
（4）显色液：A/B 液
（5）终止液：4N H2SO4
（6）酶标板、酶标仪。
检测步骤：
（1）将待检血清用稀释液从1：100 开始作2 倍连续稀释，加入抗原孔，
100μl/孔，同时设阴、阳性对照，37℃水浴1 小时；
（5）弃去血清，用洗涤液洗涤5～6 次；
（6）加酶结合物，用稀释液按工作浓度稀释，100μl/孔，37℃水浴1 小时；
（7）弃去酶标抗体，用洗涤液洗涤6 次，甩干；
（8）加显色液：于各反应孔内加A/B 液各一滴，37℃，避光3～5 分钟；
（9）加终止液于每反应孔，一滴/孔。
结果判断：
于450nm（TMB）阳性对照孔OD 值/阴性对照孔OD 值，即P/N≥2.1，对照成
立；若待检血清孔OD 值与阴性对照孔OD 比值≥2.1，则标本为出血热IgG 抗体
阳性，反之阴性。（阴性对照孔OD 值小于0.05 按0.05 记，若大于0.05 按实际
数值计算）
意义：
阳性结果，表明曾受到汉坦病毒感染，>1：100 有诊断参考意义；
恢复期血清抗体滴度比急性期抗体滴度有4 倍或4 倍以上升高则可确诊.
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