志贺氏菌属诊断血清学试验操作程序
1. 目的
制定标准化的志贺氏菌属诊断血清操作程序，指导对志贺氏菌属的检测
2. 原理
用志贺氏菌属的代表菌株制成灭活菌抗原分别或混合免疫家兔所得的血清，经吸收出去非特异性凝集素后制成，通过凝集试验原理诊断各型志贺氏菌。
3. 试剂及实验设备
3.1 志贺氏菌属诊断血清
3.2 试剂保存：2~8°C避光保存，防止冻结，在有效期内使用。
3.3 实验设备：玻片、吸样枪、接种环、水浴箱、玻璃管、血平板、营养琼脂、电热高温接种灭菌器。
4. 程序步骤
4.1 将诊断血清于冰箱取出后平衡至室温。
4.2 选择符合志贺氏菌属培养特性，并经初步生化检测符合志贺菌属生物特性的疑似菌落。
4.3 菌群分析
将经18~24h血平板上纯培养的待检菌，分别用志贺氏菌属4种多价血清做玻片凝集试验，凝集阳性时，再分别用群多价血清做玻片凝集试验，群多价血清凝集阳性时，再分别与相应的单价血清做玻片凝集试验，最终确定其血清分型。如果志贺氏菌属4种多价血清做玻片凝集试验均为阴性，可能有以下3种可能性：①K抗原的存在，处理方法：取待检菌的纯菌落于生理盐水中制成浓度约2麦氏单位的菌悬液，置于100°C水浴中煮沸30min，泠却至室温后再用诊断血清进行玻片凝集试验；②非典型菌落，处理方法：通过在营养琼脂平板上的传代让其恢复抗原性，再用诊断血清进行玻片凝集试验；③诊断血清型以外的可送市或省CDC检测。
4.4 玻片凝集试验法取18~24h血平板上纯培养的待检菌，用生理盐水制成2麦氏单位的菌悬液，取诊断血清20μL于洁净玻片上，然后取20μL待检菌悬液与血清混匀，轻轻摇动玻片，1min内呈现明显凝集者为阳性，呈均匀浑浊者为阴性，每次凝集试验均应以生理盐水作为阴性对照试验。若与福氏志贺氏菌单价血清呈现凝集可参照福氏志贺氏菌诊断抗原表（见附表）及生化特性做菌型诊断。
5. 质量控制
志贺氏菌属4种多价血清选择福氏志贺氏菌属为阳性对照株；选择大肠埃希菌ATCC25922为阴性对照菌株。同一批号每月进行一次质控试验，新批号试剂进行质控试验。
6. 质量记录
7. 参考文献
[1] 卢锦汉主编.医学生物制品学.北京.人民卫生出版社.1995
[2] 中国生物制品规程（2000年版）.北京.化学工业出版社.2000
附表：志贺氏菌属国内常见菌型诊断抗原表
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菌型 |
福氏志贺菌多价血清 |
型特异血清 |
群因子血清 |
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1 2 3 4 5 6 |
3,4 6 7 |
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福氏志贺氏菌1a 福氏志贺氏菌1b 福氏志贺氏菌2a 福氏志贺氏菌2b 福氏志贺氏菌3a 福氏志贺氏菌3b 福氏志贺氏菌4a 福氏志贺氏菌4b 福氏志贺氏菌5a 福氏志贺氏菌5b 福氏志贺氏菌6 福氏志贺氏菌X变种 福氏志贺氏菌Y变种 |
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注：该文章由健仑生物研究人员以依据日本生研公司生产的志贺氏诊断血清实验编写.
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