印迹技术简介-广州健仑生物科技有限公司

发布时间：2016-6-23 17:01:01 浏览次数：

印迹技术是指将待测核酸分子结合到一定固相支持物上的方法。

southern印迹，将电泳分离的DNA片段转移到一定的固相支持物上的过程。

DNA分子被限制酶切，经琼脂糖凝胶电泳，将DNA片段按照分子量大小分离，然后将含DNA片段的琼脂糖凝胶变性，将其中单链DNA转移到硝酸纤维滤膜或者其他固相支持物上。而DNA片段的相对位置保持不变。可做下一步杂交反应。

northern印迹，将RNA变性及电泳分离后，将其转移到固相支持物上的过程。

western印迹

也称Western免疫印迹（WesternBlot或WesternBlotting），是指将蛋白质样品经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，然后转移至到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，然后用抗体通过免疫学反应检测目的蛋白，分析基因的表达程度。能用碱变性，防止水解。用甲醛变性。

southern印迹的步骤

1.从组织中提取DNA

2.用特定的核酸内切酶酶切

3.琼脂糖凝胶电泳

4.碱变性

5.中和反应

6.转膜

7.固定

8.杂交

9.杂交信号检测

northern印迹的步骤:

1.从细胞中提取总RNA

2.甲醛凝胶变性电泳

3.转膜

4.固定

5.杂交

6.杂交信号检测

western印迹的步骤

1.蛋白质样品制备

2.SDS-PAGE电泳

3.转膜

4.封闭

5.一抗孵育

6.二抗孵育

7.显色