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汉坦病毒IgM 捕捉ELISA 法(MacELISA) 实验

发布时间:2014-3-8 9:44:12      浏览次数:

           IgM 捕捉ELISA 法(MacELISA)检测出血热IgM 抗体


本试剂盒系采用抗人μ 链捕获人血清IgM 抗体,加辣根过氧化物酶-病毒
抗原标记物,用以检测出血热特异性IgM 抗体。具有较高的敏感性、特异性和重
复性。特别适用于出血热的早期特异性诊断及其它实验性研究。本试剂盒为96
人份/包装。
试验材料:
(1)抗人IgM 抗体(μ 链):用pH9.5 的包被液包被酶标板
(2)冻干阳性血清/冻干阴性血清1 支, 0.2ml/支,工作浓度为1:10;
(3)冻干辣根过氧化物酶-病毒抗原标记物1 支, 0.5ml/支,工作浓度为
1:20;
(4)冻干小牛血清1 支,1ml/支;
(5)浓缩洗液(10 倍浓缩)1 瓶,50ml;(标本稀释液为含5%小牛血清原倍
洗液);
(6)A/B 显色液和终止液各1 瓶。
(冻干试剂先用相应量的去离子水溶解,然后临用前根据所需按工作浓度稀
释使用,余下的放-20℃保存)
(7)终止液:4N H2SO4
(8)酶标仪。
检测步骤:
(1)将待检血清用稀释液100 倍稀释,加入已包被抗人μ 链抗体的酶标板
一孔中,100μl/孔,同时加入已1:10 稀释的阳性血清/阴性血清对照各一孔,
100μl/孔,置37℃水浴孵育1 小时。
(2)弃去血清,用PBS-T 漂洗5 遍,甩干。
(3)将冻干辣根过氧化物酶-病毒抗原标记物1:10 稀释后,加入反应板
相应孔内,100μl/孔,37℃水浴孵育1 小时。
(4)弃去酶标抗体,用洗涤液洗涤6 次,甩干。
(5)加显色液:于各反应孔内加A/B 液各一滴,37℃,避光3~5 分钟。
(6)加终止液(4NH2SO4)于每反应孔,一滴/孔。
结果判断:
(1)目测方法:
阳性对照孔呈明显蓝色,阴性对照孔呈无色,对照成立;若待检血清孔呈明
显淡蓝色或深蓝色(TMB),则标本为出血热IgM 抗体阳性,反之阴性。
(2)酶联免疫检测仪检测:
于450nm(TMB)阳性对照孔OD 值/阴性对照孔OD 值,即P/N≥2.1,对照成
立;若待检血清孔OD 值与阴性对照孔OD 比值≥2.1,则标本为流行性出血热IgM
抗体阳性,反之阴性。
(阴性对照孔OD 值小于0.05 按0.05 记,若大于0.05 按实际数值计算)
意义:
阳性结果,表明患者新近汉坦病毒感染,用于出血热早期诊断。