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登革热IgM抗体检测作业指导书

2013-10-13 9:22:12      点击:

1.  目的

根据国家标准ws216-2008,规范本中心登革热IgM抗体的检测。

2.  适用范围

2.1  适用于血清或血浆中登革热IgM抗体的检测。

3.  职责

检测人员:负责按照本检测细则对被测样品进行检测。

复核人员:负责对检测操作是否规范以及检测结果是否准确进行复核。

科室负责人:负责对检测操作的监督和检测结果的审核。

4.  规程:亲和素-生物素法检测登革热IgM抗体。

4.1  原理:在微孔条上包被生物素化抗原,配以酶标记抗人IgM单克隆抗体作为标记抗原及TMB显色剂等其它试剂,采用亲和素-生物素法检测登革热IgM抗体。

4.2  试剂

4.2.1  生物素化抗原预包被板

4.2.2  阴性、阳性对照

4.2.3  酶结合物

4.2.4  30X浓缩洗涤液。(用蒸馏水130稀释使用)

4.2.5  显色剂AB液。

4.2.6  终止液。

4.2.7  封片。

4.3  仪器与设备

4.3.1  20-200μL可调移液器。

4.3.2  电热恒温水温箱。

4.3.3  微量振荡器。

4.3.4  洗板机、酶标仪。

4.4  操作步骤

参照试剂盒说明书或按以下步骤操作。

4.4.1  将试剂盒平衡至室温后取出反应板拆封。

4.4.2  加样:将待检标本用标本稀释液141稀释(5ul-200ul,于反应板中加稀释好的待检标本及阴阳对照各100ul/孔,设空白对照一孔(不加任何液体),轻轻混匀。37℃温育30分钟。

4.4.3  甩去孔内液体,用洗涤液洗板3次并拍干。

4.4.4  加酶结合物:每孔2滴,混匀后置37℃温育30分钟。

4.4.5  4.4.3步骤。

4.4.6  显色:每孔加显色剂AB各一滴,用震荡器混匀,后置37℃温育10分钟

4.4.7  用酶标仪读数,取波长450nm,先用空白孔校零,然后读取各孔OD值。

4.4.8  结果判断

4.4.8.1  P/N=标本OD/阴性对照OD

4.4.8.2  P/N2.1为阳性;

4.4.8.3  1.5P/N<2.1 为可疑标本;P/N<1.5为阴性。

4.4.8.4  阴性对照(NC)小于0.10时以0.10计,大于0.1小于0.21时以实际OD值计算;若大于0.21时,实验可能出现了较大误差,需重复实验。

4.4.8.5  阳性对照(PC)值≥0.4,实验成立,否则需重做。

4.6  注意事项

4.6.1  从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37℃平衡30分钟后方可使用,余者应及时封存于冰箱中以备后用。在平衡试剂的同时,待测标本需置室温平衡30分钟后再行测试。

4.6.2  使用前试剂应摇匀,并弃去12滴后垂直滴加。

4.6.3  封片不能重复使用。

4.6.4  结果判断须在反应终止后10分钟内完成。

4.6.5  不同批号的试剂不可混用。

4.6.6  待测标本不可用NaN3防腐,如需稀释标本,请用小牛血清稀释。

4.6.7  洗涤时每孔均须加满,防止孔内有游离酶不能洗净。

4.6.8  避免用溶血、混浊或脂血标本。

广州健仑生物科技有限公司

2005/05/06